內標物(Internal Standard, IS)指在定量分析中,以恒定濃度添加至所有待測樣品的化學物質。該技術廣泛應用于色譜與光譜分析領域,可顯著提升數據可靠性。例如白酒氣相色譜儀分析組分含量中用到白酒內標物-乙酸正丁酯。
計算原理與誤差校正機制
目標分析物的定量計算不直接依賴其峰面積,而是通過峰面積比實現:
峰面積比 = 分析物峰面積 / 內標物峰面積
此方法可有效抵消樣品前處理與儀器進樣環節的波動影響。由于內標物與目標物在實驗流程中經歷相同干擾,二者的響應變化呈同步性,通過比值計算可系統性降低隨機誤差與系統誤差,提升結果精密度,減少重復實驗需求。
選擇標準:
● 分離度:確保內標物與樣品基質及其他組分無交叉干擾;
● 物化性質匹配性:優先選擇與目標分析物極性、揮發性等性質相近的物質,以保證保留時間、峰形及檢測器響應的一致性;
● 同位素標記策略:在GC-MS分析中,常采用目標物的氘代衍生物作為內標(如氘代丁子香酚),因其理化特性高度相似但質譜信號可區分。
● 濃度控制:全程保持內標物濃度恒定,且與目標物濃度范圍相近;
● 前處理階段介入:樣品制備初期添加內標物,可校正提取、純化等步驟的回收率偏差,尤其適用于復雜基質樣本;
● 多內標聯用:針對多組分/寬濃度體系,可依據目標物結構差異分級使用多個內標,例如:
1、低濃度組分選用高響應內標;
2、極性差異組分匹配對應極性的內標。